三步法染色液組成：
石碳酸復紅溶液
（R1）1份
鹽酸酒精溶液
（R2）2份
美藍溶液
（R2）1份
三步法染色液性狀：
R1為紅色液體
R2為無色液體
R3為藍色液體
冷染法（三步法）：
a)涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片間距保持10 mm以上距離；火焰固定（玻片在火焰上快速通過4次）。
b)滴加R1染色5～10分鐘（不需加熱），水洗。
c)滴加R2脫色3～5分鐘，至無紅色，水洗。
d)滴加R3復染30秒鐘，集菌涂片復染1～3分鐘，水洗，待干鏡檢。
